Der Lentivirus-Vektor ist basiert auf HIV-1 (humane Immunodeficiency Virus-1) und wurde aus dem Herpes-Virus-VSVG-Kapsid entwickelt. Es ist ein Pseudovirus, da seine pathogenen Gene gelöscht und durch exogene Zielgene ersetzt werden. Lentiviren haben ein breites Infektionsspektrum und können teilende und nicht teilende Zellen effektiv infizieren. Exogene Gene können durch Lentiviren effektiv in Wirtschromosomen integriert werden, um eine kontinuierliche Expression zu erreichen. Somit ist das Lentivirus ein nützliches Werkzeug zum Einführen von exogenen Genen geworden. Lentivirale Systeme wurden in zahlreichen Zelllinien für Gen-Knockin / Knockout, Überexpression, RNA-Interferenz, mikroRNA-bezogene Untersuchungen und in-vivo-Experimente eingesetzt.
Produktspezifikationen
| Standard |
Titer |
Bearbeitungszeit |
Anwendung |
| Standard |
1*10^8 TU |
2-3Wochen |
Zelltransduktion |
| Großformat |
1*10^9 TU |
2-3Wochen |
Zelltransduktion |
| Ultra-gereinigt |
1*10^9 TU |
2-3Wochen |
In vivo Injektion |
>Workflow und Validierung
FAQ über Lentivirus, Zum Anzeigen klicken 
·FAQ über Lentivirus
1. Wie lange dauert die Genexpression nach der Transduktion?
Die Expression nach der Transduktion des Lentivirus dauert lange. Die Fluoreszenz kann jedoch 24 Stunden nach der Transduktion auf den Zellen mit starkem Metabolismus (wie 293T, HEK293 usw.) beobachtet werden; Die fluoreszierende Proteinexpression von Zellen mit langsamem Metabolismus (wie in Primärkulturzellen, neuronalen Stammzellen, embryonalen Stammzellen usw.) dauert länger, d. h. 72-96 Stunden oder sogar länger nach der Transduktion. Die transduzierte Zellen können eine Woche lang kontinuierlich kultiviert werden und der Effekt der Transduktion des Virus auf die Zielzellen kann durch Beobachtung der Expressionszeit und der Intensität der Fluoreszenz bestimmt werden.
2.Wie kann die Transduktionseffizienz verbessert werden?
Stellen Sie sicher, dass sich die Zellen vor der Transduktion in einem guten Wachstumszustand befinden. Verwenden Sie 293T für den Titertest, um zu überprüfen, ob der Virustiter signifikant abfällt; Erhöhen Sie den MOI richtig und verlängern Sie die Transduktionszeit.
3.Nach der Lentivirus-Transduktion ist der Zustand der Zellen sehr schlecht oder es kommt sogar zu einer großen Anzahl von Todesfällen. Wie kann man dieses Problem lösen?
Schlechte Zellbedingungen vor der Transduktion, überschreitende MOI, und Zytotoxizität der Zielgene können zu abnormalem Zustand der Zellen führen. Die hauptlösungen sind:
(1) Der Zustand der Zellen vor Transduktions sollte sicher gestellt werden;
(2) Die MOI sollte verringert werden, um die Zytotoxizität des Zielgens zu verifizieren;
(3) Beobachten Sie die Zellen nach 6 Stunden Transduktion, wechseln Sie das frische Medium im Falle einer Anomalie der Zellen, wenn nicht, wechseln Sie das Medium 24 Stunden später.
Die Lentivirus-Knockout-Plasmide werden als Lentiviren verpackt. Nachdem die Zellen mit Lentiviren infiziert werden, können gRNA und Cas-Protein stabil expremiert werden, um das Zielgen zu knockout.
Selektion des Knockout-Lentivirus:
|
YKO-serie
|
Vektor
|
Reporter-Gen; Selektionsmarker
|
|
Lentivirales YKO-Plasmid
|
YKO-LV001-single-gRNA
|
EGFPv/mCherry,Puro/Neo
|
|
YKO-LV001-dual-gRNA
|
EGFPv/mCherry,Puro/Neo
|
|
Lentiviral Cas9 plasmid
|
YCas-LV001
|
EGFPv
|
|
YCas-LV002
|
Hygro
|
Wegen der Einschränkung der Lentivirus-Kapazität sollte das Cas9-Protein (~ 4 kb) getrennt von der gRNA verpackt werden. Im Allgemeinen werden die beiden Lentiviren verwendet, um die Wirtszellen zu co-infizieren.
Das Genexpressionsplasmid wird als Lentivirus konstruiert und verpackt. Nach der Infektion der Wirtszellen mit Überexpression-Lentivirus kann die von dem Virusvektor getragene Arzneimittelresistenz zum Screening verwendet werden, um stabile zielgenexpremierende Zelllinien zu erhalten. Lentivirus kann in vitro (einschließlich Zelllinien, immortalisierten Zellen, Primärzellen und Stammzellen) und in vivo verwendet werden.
Selektion des Genexpression-Lentivirus-Vektors
|
YOE-Serie
|
Vektor
|
Reporter-Gen; Selektionsmarker
|
|
Lentivirales YOE-Plasmid
|
YOE-LV001
|
EGFP/Puro
|
|
YOE-LV002
|
mCherry/Puro
|
|
YOE-LV003
|
EGFP/Neo
|
|
YOE-LV004
|
mCherry/Neo
|
|
YOE-LV005
|
Puro
|
|
YOE-LV006
|
EGFP
|
|
YOE-LV007
|
mCherry
|
|
YOE-LV008
|
Luciferase/Puro
|
Das shRNA-Expression-Vektor wird als Lentivirus konstruiert und verpackt. Nach der Infektion der Wirtszellen mit Lentivirus kann die von dem Virusvektor getragene Arzneimittelresistenz zum Screening verwendet werden, um stabil zielgenexpremierende Zelllinien zu erhalten. Lentivirus kann in vitro (einschließlich Zelllinien, immortalisierten Zellen, Primärzellen und Stammzellen) und in vivo verwendet werden.
Gene interference lentivirus vector selection ：
|
YSH-series
|
Vektor
|
Reporter-Gen; Selektionsmarker
|
|
Lentivirales YSH-Plasmid
|
YSH-LV001-shRNA
|
EGFP/Puro
|
|
YSH-LV002-shRNA
|
mCherry/Puro
|
|
YSH-LV003-shRNA
|
EGFP/Neo
|
|
YSH-LV005-shRNA
|
EGFP/Hygro
|
|
YSH-LV004-shRNA
|
mCherry/Neo
|
|
YSH-LV006-shRNA
|
Puro
|
|
YSH-LV007-shRNA
|
EGFP
|
|
YSH-LV008-shRNA
|
mCherry
|
|
YSH-LV009-shRNA
|
Luciferase/Puro
|
Phone
Contact
