Adeno-associated Virus (AAV) Packaging

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Effiziente Transfektion von Viren
Ubigene bietet Lentiviren, Adenoviren und Adeno-assoziiertes Viren (AAV) mit verschiedenen Größen und Reinigungsgraden. Unsere Produkte können in vitro und in vivo leicht Knockout (KO), Überexpression und Knockdown erreichen.
Vergleich verschiedener Viren:
Typ Lentivirus Adenovirus AAV
Herkunft HIV-1 Adenovirus Typ 5 AAV2
Genom Zwei lineare und kontinuierliche einzelsträngige RNAs Eine lineare und kontinuierliche doppelsträngige DNA Eine lineare und kontinuierliche einzelsträngige DNA
Genome size ~9.2 kb (WT) ~36 kb (WT) ~4.7 kb (WT)
Dauer der Expression Langzeitstabile Expression Vorübergehende Expression Langzeitige Expression
Integration zum Zellgenom Ja Nein Niedrige Frequenz
Immunogenität Gering Hoch Sehr gering
Kapazität ~6,4 kb ~8,3 kb ~4,7 kb
Advantages

· Breites Anwendungsspektrum;
· Hohe Transduktionseffizienz;
· Stabil vererbbar.

· Hohe Transduktionseffizienz;
· Große Kapazität;
· Erweiterbar.

· Geringe Immunogenität;
· Hohe Sicherheit;
· Hohe Spezifität.

Technische Details zur AAV-Verpackung
Adeno-assoziiertes Virus (AAV, Adeno-associated virus) ist eine Art der Parvoviren, dessen Genom einzelsträngige DNA ist. Es kann sowohl teilende als auch nicht teilende Zellen infizieren. Adenoviren oder Herpesviren werden normalerweise benötigt, um die Replikation von AVV in vivo zu unterstützen. Rekombinantes AAV (rAAV) ist ein viraler Vektor, der das AAV2-Genom mit Kapsidprotein-Genomen verschiedener Serotypen kombiniert. CDS- oder RNAi-Interferenzsequenzen der Zielgene können in das rAAV-Plasmid inseriert werden. AAV wird hauptsächlich in vivo Injektion verwendet, da es eine geringe Immunogenität und Langzeitexpression hat.
Ubigens AAV wird durch Ultrazentrifugation gereinigt und seine Genomkopie wird durch qPCR titriert. Der Titer von AAV lag im Bereich von 10 ^ 12 bis 10 ^ 13 v. g. / ml.
Verschiedene Serotypen der AAVs haben unterschiedeliche Transduktionseffizienzen für Gewebe und Zellen. Es gibt 10 verschiedene AAV-Serotypen in unserem Verpackungsservice. Es wird empfohlen, dass Kunden die entsprechenden AAV-Serotypen für verschiedene Gewebe auswählen:
Serotyp Gewebe
AAV1 SM, CNS, Lunge, Netzhaut, Pankreas, Herz, Leber
AAV2 SM, SNS, Leber, Niere, Netzhaut
AAV3 SM
AAV4 CNS, Netzhaut, Lunge, Niere
AAV5 SM, CNS, Lunge, Netzhaut
AAV6 SM, Herz, Lunge, Fettgewebe, Leber
AAV7 SM, Netzhaut, CNS, Leber
AAV8 SM, CNS, Netzhaut, Leber, Pankreas, Herz, Niere, Fettgewebe
AAV9 SM, Lunge, Leber, Herz, Pankreas,CNS, Netzhaut, Hoden, Niere
AAVrh10 SM, Lunge, Leber, Herz, Pankreas,CNS, Netzhaut, Niere
AAVPHP.B CNS
AAVDJ/8 SM, Leber, CNS, Netzhaut
AAVPHP.S PNS
AAVPHP.eB CNS (Stärker als AAVPHP.B)
Produktspezifikationen
Standard Titer Bearbeitungszeit Anwendung
Standardformat 1*10^11 GC 2-3Wochen Zelltransduktion
Ultra-gereinigtes großes Format 1*10^12 GC 2-3Wochen In vivo Injektion
Workflow und Validierung：


Knockout-AAV
Der Gen-Knockout-AAV-Vektor wird als AAV konstruiert und verpackt. Nach der Ultrazentrifugationsreinigung kann es für die in-vivo-Injektion verwendet werden. Mit AAV infizierte Zellen können gRNA und Cas9-Protein stabil exprimieren, um das Zielgen zu knockout.
Selektion des Genknockout-AAV-Vektors
YKO-serie Vektor Reporter-Gen; Selektionsmarker
AAV YKO plasmid YKO-AAV001-gRNA EGFP
YKO-AAV002-gRNA mCherry
Der Gen-Überexpression-Vektor wird als AAV konstruiert und verpackt. Nach der Ultrazentrifugationsreinigung kann es für die in-vivo-Injektion verwendet werden.
Expression-AAV
The The gene overexpression vector would be constructed and packaged as AAV. After ultracentrifugation purification, it can be used for in vivo injection.
YOE-serie Vektor Reporter-Gen; Selektionsmarker
AAV YOE-plasmid YOE-AAV001 EGFP
YOE-AAV002 mCherry
Promoter Description Tissue Cell type Reference
Nes Rat nestin intron 2 enhancer fused to mouse Hsp68 minimal promoter Nervous system at embryonic stage Neural stem/pro-genitor cells Eur J Neurosci. 9:452 (1997); J Neurosci Res. 59:321 (2000)
Camk2a_short Mouse α-calcium-calmodulin dep-endent kinase II promoter (1.3 kb) Brain Pyramidal neurons Neuroscience. 161:441 (2009)
SYN1 Human synapsin I promoter Brain Mature neurons Mol Ther. 5:509 (2002)
Nes Rat neuron-specific enolase promoter Nervous system Various neurons Neuron. 5:187 (1990); J Mol Neurosci. 8:63(1997)
GFAP_short Human glial fibrillary acidic protein promoter (0.68 kb) Brain Astrocytes Glia. 56:481 (2008)
K14 Human keratin 14 promoter Epidermis Keratinocytes Gene. 153:297 (1995)
cTnT Chicken cardiac troponin T promoter Heart Cardiomyocytes Am J Physiol Cell Physiol. 286:C556 (2004); Gene Ther. 18: 43 (2011); Circ Res. 115:354 (2014)
alphaM-HC_short Mouse α-cardiac myosin heavy chain promoter (2.8 kb) Heart Cardiomyocytes Neuroscience. 161:441 (2009)
Myog Mouse myogenin promoter Muscle Myoblasts Genes Dev. 7:1277 (1993)
MHCK7 Composed of enhancer/promoter regions of murine muscle creatine kinase (MCK) and enhancer region of α-myosin heavy-chain genes. Genes Dev. 7:1277 (1993) Differentiated postmitotic stria-ted muscle cells Mol Ther. 15:320 (2007); Sci Transl Med. 9(418) (2017)
SM22a Mouse transgelin (a.k.a. Sm22a) promoter Adult smooth muscle Vascular smooth muscle cells J Cell Biol. 132:849 (1996)
EnSM22a The chimeric vascular smooth muscle-specific enhancer/promoter (The rabbit myosin heavy-chain enh- ancer inserted upstream of a truncated mouse SM22a promoter) Adult smooth muscle Vascular smooth muscle cells J Pharmacol Exp Ther. 329: 775 (2009)
Tie1 Mouse tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 1 promoter Blood vessel Endothelial cells J Cell Sci. 115:2075 (2002)
CD68_short Human CD68 promoter, short, recommended for in vitro use Blood Monocytes and macrophages Gene Ther. 19:1041 (2012)
Alb Mouse albumin promoter Liver Mature hepatocytes Genes Dev. 1:268 (1987)
TBG Human thyroxine-binding globulin promoter Liver Hepatocytes Gene. 506:289 (2012)
MMTV Mouse mammary tumor virus long terminal repeat (LTR) Mammary gland Ductal cells of the salivary gland, mammary epithelial cells Nucleic Acids Res. 25:4323 (1997)
HIP Human insulin promoter Pancreas β cells Cell. 52:773 (1998); Proc Natl Acad Sci U S A. 100: 6688 (2003)
Pdx1 Mouse pancreatic and duodenal homeobox 1 promoter Embryonic develo-ping pancreas and adult pancreatic islets Pancreatic proge-nitor cells and pancreatic β cells Development. 129:2447 (2002)
SP-B Human surfactant protein B promoter Lung AT II cells (alveolar type II epithelial cells) and Clara cells (bronchiolar epithelial cells) J Biol Chem. 270:24852 (1995); Gene Ther. 14:1461 (2007)
CD144 Human cadherin 5 (a.k.a. VE-Cadherin) promoter Lung, heart, ovary, spleen and kidney glomeruli Vascular endothelial cells Oncogene. 24:2992 (2005)
Knockdown-AAV
The gene knockdown vector would be constructed and packaged as AAV. After ultracentrifugation purification, it can be used for in vivo injection.
YSH-serie Vektor Reporter-Gen; Selektionsmarker
AAV YSH-plasmid YSH-AAV001-shRNA EGFP
YSH-AAV002-shRNA mCherry
Kunden können eine Vielzahl von gewebespezifischen Promotoren auswählen, die eine gewebespezifische Expression in vivo erzielen können.


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